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Detección de mutaciones de resistencia en el dominio Tirosina Quinasa en pacientes con LMC


La leucemia mieloide crónica (LMC) se caracteriza por la presencia de la traslocación (9:22) (cromosoma Filadelfia), lo que resulta en la formación de un gen de fusión BCR/ABL1. El componente ABL1 de esta oncoproteína contiene actividad tirosina quinasa que desempeña un papel central en el fenotipo proliferativo de esta leucemia.


Utilidad Clínica:

Esta prueba puede ser útil para:

  • La evaluación de pacientes con leucemia mieloide crónica y leucemia linfoblástica aguda de células B positiva para el cromosoma Filadelfia que reciben terapia con inhibidores de la tirosina quinasa (TKI), con aparente fallo en el tratamiento.

  • Prueba inicial para identificar la presencia de mutaciones adquiridas en BCR-ABL1 asociadas con resistencia a la terapia con TKI.

Mutaciones evaluadas:

E255K, E355G, F317L, F369V, G250E, H396R, M244V, M351T, Q252H, T315I, Y253F, Y253H, T315A, V299L.


¿Cómo solicitarlo?

En Meyer Lab contamos con el estudio de detección de BCR/ABL1: Análisis 3144 (BCR/ABL, RESISTENCIA AL INHIBIDOR DE TIROSINA QUINASA, SANGRE, CLÍNICA MAYO - BAKDM).


Requerimientos:

Tipo de muestra:

​Sangre entera (EDTA)

Volumen:

​10 mL

Recipientes:

​Tubo con EDTA (tapa lila)

Condiciones de la muestra/estabilidad:

​Refrigerada: 5 días

Criterios de rechazo de la muestra:

Presencia de hemólisis macroscópica

Presencia de coágulos

Volumen menor a 10ml.

Método:

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Tiempo de respuesta:

Dentro de los 15 días desde el envío de la muestra.

Datos del paciente necesarios:

  1. Tipo de fusión del paciente (p210, p190, p205 o p230).

  2. Historia clínica pertinente del paciente.

  3. Sospecha clínica o morfológica.

  4. Fecha de toma de muestra.


¿Qué día se realiza la toma de muestra?

Es posible agendar la toma de muestra de sangre en el laboratorio o remitir en contenedores refrigerados. Se recomienda en ambos casos que la toma de muestra o remisión sea los días martes para respetar las condiciones de estabilidad.

¿Qué información se recibe en el reporte final?

En el resultado se informa el resultado de la secuenciación y detección de la mutación en BCR/ABL1 y su posible interpretación para la resistencia al tipo de droga.


Interpretación de resultados:

La presencia de una o más mutaciones puntuales en la porción translocada de la región ABL1 del ARN mensajero de fusión BCR/ABL1 se considera un resultado positivo, lo que indica resistencia al inhibidor de la tirosina quinasa (TKI). El tipo específico de mutación puede influir en la sensibilidad a un TKI específico y podría ser útil para guiar las opciones terapéuticas para un paciente individual.


Precauciones con los resultados:

Este ensayo permite detectar mutaciones en el dominio quinasa (KD) de BCR/ABL1, pero no detecta todas las mutaciones posibles en ABL1; por lo tanto, un resultado negativo de este ensayo no excluye la presencia de una mutación rara, menos bien caracterizada o desconocida que podría estar asociada con algún grado de resistencia a los inhibidores de la tirosina quinasa. Sin embargo, la importancia clínica de tales mutaciones raras es incierta.


El nivel cuantitativo del transcripto BCR/ABL1 es crítico para un análisis de mutación exitoso porque la eficiencia de amplificación para un templado de ARNm más largo disminuye con una baja abundancia del target. Si el nivel de PCR cuantitativa de BCR/ABL1 es demasiado bajo, es posible que la amplificación por PCR de transcripción inversa de BCR/ABL1 no produzca el producto para la secuenciación. Aunque aún no se han desarrollado estándares de laboratorio, generalmente se considera que se requiere un nivel cuantitativo de BCR-ABL1/ABL1 superior al 0,1% para detectar mutaciones de KD mediante este ensayo.


Las mutaciones subclonales pueden ser difíciles de identificar mediante el método de secuenciación de Sanger, incluso si la amplificación del ARNm de BCR/ABL1 fue satisfactoria. Esto se debe al límite del nivel de sensibilidad heredado de la secuenciación, que normalmente es de alrededor del 15 al 20% de alelo mutante en un fondo wild-type.


Información importante:

Si no se proporciona el tipo de fusión BCR/ABL1 (p210, p190, p205 o p230), se realizará un ensayo cualitativo para detectar la presencia del gen de fusión, con un cargo adicional.

Contamos con una alianza con Mayo Clinic Laboratories (Rochester, Estados Unidos) para ofrecer estudios de una amplia variedad de análisis especializados. Mayo Clinic Laboratories es un laboratorio de referencia mundial que ayuda a los profesionales de la salud de todo el mundo a avanzar en la atención al paciente, a fortalecer su práctica y a ampliar el acceso a pruebas especializadas. Catálogo de análisis


 

Referencias:

  1. Neuendorff NR, Burmeister T, Dörken B, Westermann J. BCR-ABL-positive acute myeloid leukemia: a new entity? Analysis of clinical and molecular features. Ann Hematol. 2016;95(8):1211-1221.

  2. Marcé S, Zamora L, Cabezón M, et al. Frequency of ABL gene mutations in chronic myeloid leukemia patients resistant to imatinib and results of treatment switch to second-generation tyrosine kinase inhibitors. Med Clin (Barc). 2013;141(3):95-99.

  3. Mayo Foundation for Medical Education and Research. BCR/ABL1, Resistencia al inhibidor de Tirosina Kinasa, Análisis de mutación en el dominio Tirosina Kinasa

  4. Sangre [Internet]. Mayo Clinic Laboratories [consultado el 16 de Diciembre del 2022]. Disponible en: https://www.mayocliniclabs.com/test-catalog/overview/89609#Overview


 

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